Two-color ImmunoCytoChemistry staining (2 color- ICC 염색)- Rapid/simple methods 입니다.

ICC staining 이란?

일반적으로 ICC 염색 (ImmunoCytoChemistry Staining)을 수행하는 목적은 세가지 입니다.

첫번째는 타겟 단백질의 세포내 위치 확인하기 위해서, 두번째는 발현시킨 외부유전자의 발현을 확인하기 위해서, 마지막으로 "세번째는 2가지 이상의 단백질의 상호간 관련성 (interaction)을 확인 및 검증"하는 것입니다. 물론, 한꺼번에 모두 확인할 수도 있습니다.

 

대부분의 실험은 부착세포에서 세포내 / 핵 단백질을 염색하는 방법 입니다 (링크 참조). 그리고, 세포의 상태와 염색하고자 하는 단백질의 세포내 위치에따라  현탁액에서 고정되지 않은 세포에 표면 단백질 염색방법 (FACS 적용가능) (링크참조) 과 부착 또는 부유 세포의 표면 항원의 형광 염색방법 (링크참조) 이 방법이 조금씩 상이합니다. 자세한 내용은 링크를 클릭하시면 확인하실 수 있습니다.

 

이번에는 위 "2가지 이상의 단백질의 상호 관련성" 을 확인하기 위해 앞서 설명 및 방법을 제시했던 ICC 염색법을 기반으로 Two-color ICC staining (염색법) 에 대해 간략하게 소개합니다. 

논문용 figure(data) 를 만들기 위한 방법이라기 보다는 빠르고 간단하게 "실험자" 입장에서 확인할 수 있는 방법입니다. (잘~ 나오면 figure 로 사용하셔도 됩니다 ^^)

 

※  Procedure

- 사용되는 buffer 및 자세한 내용은 위에 링크에서 확인하세요. ^^

 

2-color ICC staining Methods

* Mounting Sol ; anti-fading medium or 90% glycerol containing DAPI

  또는 DAPI (Final conc. 0.1~1 µg/ml in PBS) 염색 후 wash 후 mounting 하시기를 추천합니다.

 

※ Antibody (Ab) 선택 및 조건 선정

- 2 color 형광은 대부분 Red / Green 으로 선택합니다. (counter staining DAPI - Blue)

- 2가지 Ab의 source 는 아래 표에 정리 해 놓았습니다. 참고하세요

- 2가지 Ab 는 가능하면 각각 Mono Ab / Poly Ab 를 사용하시기를 추천합니다.

- 동시에 섞어서 사용해도 무방하며, 순서도 상관없지만, Mono Ab 반응 후 Poly Ab순서로 하시길 추천합니다.

Name	dilution rate	caution
1st Ab	1: 500 ~ 1,000 source - Rabbit ; poly / Mouse ; mono (추천)                Mouse  / Goat (추천)                Rabbit / Goat (비추천)                Mouse / Rat (비추천)	tagging sequence 선정 C-myc / 6x His / Flag / HA / V5
2nd Ab	1: 5,000 ~ 10,000 anti-Rabbit-546 (Red) / anti-mouse-488 (Green)                     PE / FITC 종류도 가능합니다.	Light Protecting

 

질문 사항이 있으시면, 아래 댓글(비공개) 남겨 주시면 답변드리겠습니다.

 즐거운 실험! 활기찬 실험실 생활 되세요. 홧팅!!!