대장균 형질전환 실험 방법 (E.coli Transformation) - DH5α/CaCl2 methods 기준입니다.

플라스미드(plasmid) 를 이용한 대장균의 형질전환 (E. coli Transformation)

 

플라스미드(plasmid)는 세균 내 유전자 DNA 조각입니다. 이 작은 조각들이 세포 안에서 복제되어 증식하게 되면 생명체처럼 행동하기 시작하는데 이를 형질전환(transformation)이라고 합니다. 플라스미드(plasmid)는 대장균에 외부 유전자를 삽입하기 위해 가장 많이 사용되는 방법 중 하나입니다. 플라스미드를 이용하여 대장균에 유전자를 삽입함으로써 다음과 같은 분자생물학적 의의를 갖습니다. 대장균 내 유전자 삽입 기술은 생명공학 분야에서 중요한 의미를 가지며, 연구 분야에 있어서 매우 유용하게 사용됩니다.

 

1. 외부 유전자의 대장균 내 전파 - 플라스미드를 이용하여 외부 유전자를 대장균으로 삽입함으로써, 외부에서 유전자를 받아들일 수 있는 대장균 내부 유전자 전달 프로세스를 연구할 수 있습니다.

2. 단백질 생산 - 플라스미드는 대장균 내에서 단백질 생산에 이용됩니다. 이를 통해 이식 백신, 효소 생산 등과 같은 의약품 분야에서 사용할 수 있는 산업용 단백질 생산 기술을 개발할 수 있습니다.

3. 유전자 공학 - 플라스미드를 이용하여 유전자 공학에 대한 연구를 수행할 수 있습니다. 유전자 조작을 통해 생명체를 조작하는 연구 분야에서 DNA 조작을 위한 유전자 조립 및 다양한 대장균 호스트 유전자의 기능 연구 등을 수행할 수 있습니다.

 

Procedure

 

Procedure of E. coli transfromation

 

* LBapm(+) :  50~150㎍/㎖

-20℃ storage ampicillin stock (50~150㎎/㎖) ---> 1/1000 dilution 하여 사용

 

일반적으로 대표적인 대장균의 Competent cell 종류로는 다음과 같은 것들이 있습니다.

 

1. DH5α: DH5α는 일반적으로 E. coli K12 중 하나이며, 대장균 변환 과정에서 가장 흔히 사용되는 세포 중 하나입니다. 높은 산란율, 높은 수확률, 쉬운 증식력 등의 장점이 있어, 유전자 클로닝이나 DNA 스크리닝에 많이 사용됩니다.

2. TOP10: TOP10은 민감한 대장균세포들의 변환용으로 개발된 세포로, 높은 유전자 삽입 효율과 함께 시간당 단백질 생산량이 매우 높아 대량 생산이 용이합니다.

3. BL21(DE3): BL21(DE3)은 pET 벡터 시스템(단백질 표현 시스템)을 사용하는 대장균 변환에 매우 흔하게 사용됩니다. 이 세포는 T7 mRNA 글로벌 전사 체계를 이용하여 유전자 발현을 조절합니다.

4. XL1-Blue: 유전자 클로닝, DNA 스크리닝 및 일반적인 E. coli 변환에 사용되는 대장균 세포로, 높은 수확물 수확율과 높은 염기쌍 편집율을 갖습니다.

 

이외에도 대장균 경도균(Agiton E. coli), 대장균 C600(Strain C600) 등의 Competent cell이 있습니다.

선택할 Competent cell의 종류는 해당 연구에서 사용되는 대상 DNA 및 실험조건 등에 따라 결정됩니다.

competent cell (E. coli) 제작 방법은 링크(클릭) 참조하세요. ^^

 

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즐거운 실험! 활기찬 실험실 생활 되세요. 홧팅!!!