728x90 분자생물학 실험7 QIAGEN plasmid midi-prep. kits 사용, 실험 방법 요약입니다. 플라스미드(Plasmid) DNA Midi-prep. Kits 란? 플라스미드 DNA를 이용하기 위해서는 박테리아 (E. coli) 에서 분리 정제하는 과정이 필요합니다만, 일반적으로 plasmid recombinant 를 위한 cloning 과정에서는 mini-prep 을 많이 사용하게 되지만, 세포나 박테리아에 형질 전환(transduction) 또는 형질도입(transformation) 등으로 발현 세포주 (stable cell line) 제작을 위해서는 대용량 및 고순도의 plasmid DNA (vector) 가 필요합니다. 따라서, 이러한 과정을 용이하게 하기 위해 대량의 E. coli 배양 산물 (50~100 ml)에서 plasmid DNA preperation (Prep.) 혹은 purifi.. 2023. 5. 2. Cell viability (세포 생존율) 측정 방법 - MTT assay 실험 방법으로 확인 해 봅시다. MTT assay 의 원리 MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 는 정상적으로 살아있는 혹은 증식하는 세포(대사과정이 온전한 세포)에서는 미토콘드리아의 탈수소 효소작용에 의해 수용성의 노란색 MTT 를 비수용성의 MTT formazan (자주색)으로 환원시키게 됩니다. 비수용성인 MTT foramazan을 DMSO 또는 DMF 에 용해시켜 흡광도를 측정할때 파장은 540 nm이며, 측정된 흡광도가 높을 수록 살아있고 대사적으로 왕성한 세포임을 나타냅니다. 장점 : 1) sensitive, 2) accurate, 3) safety, 4) easy & rapid, 5) semiautomatic 등이 있습니다. ※ 1. MTT .. 2023. 4. 26. 쉽게 할 수 있는 ICC staining 실험 - 세포 표면 단백질 염색 방법 일반적으로 ICC 염색 (ImmunoCytoChemistry Staining)을 수행하는 목적은 세가지 입니다. 첫번째는 타겟 단백질의 세포내 위치 확인하기 위해서, 두번째는 발현시킨 외부유전자의 발현을 확인하기 위해서, 마지막으로 세번째는 2가지 이상의 단백질의 상호간 관련성 (interaction)을 확인 및 검증하는 것입니다. 물론, 한꺼번에 모두 확인할 수도 있습니다. 세포 배양 / 성장 형태, 즉 부유 / 부착 (suspension / adhesion) 세포에 따라, 그리고 타겟 단백질의 발현 위치(세포내)에 따라 적용되는 실험 방법이 조금씩 다릅니다. 이번에는 “현탁액에서 고정되지 않은 세포에 표면 단백질 염색방법” (FACS 적용가능)을 설명합니다. 현탁액에 고정되지 않은 세포 표면 단백질 .. 2023. 4. 25. 이전 1 2 3 다음 728x90
