728x90 전공이야기33 PCR-Dpn I 을 이용한 Site-directed mutagenesis 실험 방법 정리 Site-directed mutagenesis Site-directed mutagenesis는 특정 DNA 염기서열을 변화시킴을 의미하는, 분자생물학에서 중요하게 이용되는 분야이다. 즉 어떤 단백질의 기능부위를 연구할 때에 의심되는 부위의 아미노산을 다른 아미노산으로 치환 혹은 제거한 다음 기능의 변화를 관찰함으로써 기능부위를 규명할 수 있다. 또 DNA 재결합시 필요한 제한효소 절단부위를 만들거나 소실시킬 때 사용되기도 한다. 또한 promoter나 enhancer 연구에서 어떤 transacting factor가 결합하여 기능을 하는지를 알기 위하여 그 결합 부위의 염기서열을 변화 시켜서 결합을 못하게 한 다음 promoter나 enhancer의 활성을 측정함으로써 그 transacting facto.. 2022. 12. 6. RT-PCR (Revers Transcription PCR) 실험 방법 정리 RT-PCR (Revers Transcription PCR) 이란? 생물학적 샘플 (세균, 세포, 조직, 바이러스 등) 에서 특정 RNA 분자를 검출하고 정량화하는 데 널리 사용되는 실험실 기법입니다. RNA 분자가 역전사라는 과정(역전사 효소를 사용하여)을 통해 상보적 DNA(cDNA)로 합성되고결과물인 cDNA는 원본 RNA 분자의 안정적인 사본 역할을 하며 검출을 위해 쉽게 증폭할 수 있습니다. 다음과 같은실험에 응용할 수 있습니다. 1. 특정 단백질의 RNA 수준 (mRNA; transcription) 에서의 발현량 확인 2. 특정 단백질을 암호화하고 있는 gene 또는 mRNA 의 분리 3. 특정 시료를 처리한 후 특정 단백질의 mRNA 수준에서의 발현량 비교 등 원리는 옆 그림을 참조하세요. .. 2022. 12. 6. RNA 정량 (RNA 농도 측정) 방법 및 요약 정리 DNA, RNA 정량 방법 (UV-Vis spectrophotometer 사용) 분리 정제된 DNA 또는 RNA 를 정량할 수 있는 방법으로 UV 파장대 (260/280nm) 의 흡광도를 측정하여 제시된 계산식에 의해 농도(ug/㎖ or ng/㎕)을 산출할 수 있다. 분리 정제된 DNA, RNA 는 실험실 수준의 UV-Vis spectrophotometer 또는 nano-drop 장비로 측정이 가능하지만, ssDNA, ssRNA, oligomer 등은 산출은 가능하지만, 정확한 계산 또는 측정의 오차가 있으므로 해당 장비보다 정밀하고 고가의 장비를 사용하는 것을 추천한다. 참고로, RT kits 로 합성된 cDNA 의 농도는 측정 할 수 없으므로 합성 전 사용된 total RNA 의 양을 기준으로 실험을.. 2022. 12. 6. 이전 1 ··· 4 5 6 7 8 9 10 11 다음 728x90
