728x90 전공이야기/실험방법24 Plasmid DNA preperation(purification) - 플라스미드 DNA 정제 방법 (manually methods) 플라스미드(Plasmid) DNA 란? 플라스미드 DNA는 박테리아 및 일부 다른 유기체의 염색체 DNA와 분리된 일종의 원형 이중 가닥 DNA 분자입니다. 플라스미드는 일반적으로 크기가 몇 킬로베이스에서 수백 킬로베이스로 작으며 염색체 DNA와 독립적으로 복제할 수 있습니다. 전반적으로 플라스미드 DNA는 유전 연구 및 생명 공학에 중요한 도구이며 박테리아에서 자연적으로 발생하는 것은 항생제 내성의 확산과 미생물 군집의 진화에 중요한 의미가 있습니다. 인공적으로 제작된 플라스미드를 흔히 vector 또는 DNA vector 라고 표현하기도 합니다. 이러한 플라스미드의 특징을 이용하여 특정 유전자를 플라스미드에 삽입할 수 있으며 (이를 vector 라 표현함), 이를 박테리아 세포에 도입하여 원하는 유전.. 2023. 5. 2. Cell viability (세포 생존율) 측정 방법 - MTT assay 실험 방법으로 확인 해 봅시다. MTT assay 의 원리 MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 는 정상적으로 살아있는 혹은 증식하는 세포(대사과정이 온전한 세포)에서는 미토콘드리아의 탈수소 효소작용에 의해 수용성의 노란색 MTT 를 비수용성의 MTT formazan (자주색)으로 환원시키게 됩니다. 비수용성인 MTT foramazan을 DMSO 또는 DMF 에 용해시켜 흡광도를 측정할때 파장은 540 nm이며, 측정된 흡광도가 높을 수록 살아있고 대사적으로 왕성한 세포임을 나타냅니다. 장점 : 1) sensitive, 2) accurate, 3) safety, 4) easy & rapid, 5) semiautomatic 등이 있습니다. ※ 1. MTT .. 2023. 4. 26. ICC staining 실험 중 가장 어려운 "부착 세포의 표면 단백질 형광 염색" 방법입니다. ICC 염색 (ImmunoCytoChemistry Staining) 방법은 다음과 같은 3가지 방법으로 수행합니다. 대부분의 실험은 "부착세포에서 세포내 / 핵 단백질을 염색하는 방법 " 입니다 (링크 참조). 그리고, 현탁액에서 고정되지 않은 세포에 표면 단백질 염색방법 (FACS 적용가능) 으로 링크를 클릭하시면 확인하실 수 있습니다. 마지막은 지금 설명드릴 “부착 세포의 표면 단백질의 형광 염색” 방법입니다. 간단하게 소개하고, 세부적인 설명을 추가해서 요약하도록 하겠습니다. 일반적으로 ICC 염색 (ImmunoCytoChemistry Staining)을 수행하는 목적은 세가지 입니다. 첫번째는 타겟 단백질의 세포내 위치 확인하기 위해서, 두번째는 발현시킨 외부유전자의 발현을 확인하기 위해서, 마지.. 2023. 4. 25. 이전 1 2 3 4 5 6 7 8 다음 728x90
