728x90 분류 전체보기61 RT-PCR (Revers Transcription PCR) 실험 방법 정리 RT-PCR (Revers Transcription PCR) 이란? 생물학적 샘플 (세균, 세포, 조직, 바이러스 등) 에서 특정 RNA 분자를 검출하고 정량화하는 데 널리 사용되는 실험실 기법입니다. RNA 분자가 역전사라는 과정(역전사 효소를 사용하여)을 통해 상보적 DNA(cDNA)로 합성되고결과물인 cDNA는 원본 RNA 분자의 안정적인 사본 역할을 하며 검출을 위해 쉽게 증폭할 수 있습니다. 다음과 같은실험에 응용할 수 있습니다. 1. 특정 단백질의 RNA 수준 (mRNA; transcription) 에서의 발현량 확인 2. 특정 단백질을 암호화하고 있는 gene 또는 mRNA 의 분리 3. 특정 시료를 처리한 후 특정 단백질의 mRNA 수준에서의 발현량 비교 등 원리는 옆 그림을 참조하세요. .. 2022. 12. 6. RNA 정량 (RNA 농도 측정) 방법 및 요약 정리 DNA, RNA 정량 방법 (UV-Vis spectrophotometer 사용) 분리 정제된 DNA 또는 RNA 를 정량할 수 있는 방법으로 UV 파장대 (260/280nm) 의 흡광도를 측정하여 제시된 계산식에 의해 농도(ug/㎖ or ng/㎕)을 산출할 수 있다. 분리 정제된 DNA, RNA 는 실험실 수준의 UV-Vis spectrophotometer 또는 nano-drop 장비로 측정이 가능하지만, ssDNA, ssRNA, oligomer 등은 산출은 가능하지만, 정확한 계산 또는 측정의 오차가 있으므로 해당 장비보다 정밀하고 고가의 장비를 사용하는 것을 추천한다. 참고로, RT kits 로 합성된 cDNA 의 농도는 측정 할 수 없으므로 합성 전 사용된 total RNA 의 양을 기준으로 실험을.. 2022. 12. 6. RNA purification (RNA 정제) 어렵지 않아요~! 실험 진행 시 주의 사항 핵심 정리 요약입니다. RNA (Ribonucleic acid) 란? 특징 및 구성은 아래와 같다. - 전형적인 포유동물세포는 세포당 약 10-5 μg의 RNA를 함유하고 있다. - ribosomal RNA (주로 28S, 18S, 5S) 80∼85% - 여러 종류의 소분자 RNA(transfer RNA, small nuclear RNA 등) 10∼15% - mRNA는 세포내 전체 RNA중 1∼5% 정도로 크기(수백개에서 수천개 염기)와 염기배열 순서가 다양하며, 거의 모든 포유동물의 mRNA에는 3'쪽 끝에 poly(A) tail이 있어 oligo(dT) cellulose를 이용한 affinity chromatography로 순수 분리할 수 있다. RNase의 작용 최소화 - RNase 는 온도, pH 등의 극한 환경에서도 .. 2022. 12. 6. 이전 1 ··· 13 14 15 16 17 18 19 ··· 21 다음 728x90
